激光扫描共焦显微镜在生命科学研究领域用于对众多活体和固定标本进行分子和细胞解剖学、生理学和生化研究。激光扫描显微镜固有的光学切片功能使其能够根据在不同深度获得的一系列图像实现3D结构的准确高分辨率和高对比度重建。
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点扫描激光共焦显微镜是如何工作的?
共焦显微镜具有优于常规宽视场光学显微镜的几个优点,包括控制景深的能力、消除或减少焦平面的背景信息(高信噪比)的能力以及从厚标本收集连续光学切片的能力。共焦方法的基本关键是使用空间滤波技术来消除标本中当前视场之外的散焦光或眩光。
点扫描激光共焦显微镜通过在整个视场中逐点扫描聚焦激光光斑来创建标本的光学切片。显微镜的物镜将此光线聚焦在样品上。从位于焦点处的样品中的荧光团发射的光子由物镜收集,并通过扫描单元传送回来,穿过与物镜焦平面共轭的针孔,使得只有焦点处的光子才会被光电倍增管检测到。通过对激光位置的每个点处的光子进行成像,可以逐像素地重建图像。
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什么是多光子激光扫描显微镜?
多光子显微镜是一款针对厚样本进行深层成像的利器,特别是在活体实验中。强聚焦近红外激光脉冲穿透生物组织的深度优于可见光,这是由于近红外光的吸收和散射较少。为进行成像,脉冲激光扫描整个标本,通常使用700至1300 nm的激发波长。多光子激发固有的会定位在焦平面处,因此降低了光毒性。更重要的是,光学切片不需要共焦针孔,因此可以收集更多的光信号,包括散射的荧光光子。结果是可以从厚标本深处获得明亮、详细的3D图像。
如何才能使用奥林巴斯的激光扫描显微镜提高图像分辨率?
总的来说,与传统的宽视野显微镜技术相比,共焦显微镜的分辨率显著提升。由于激光扫描显微镜的分辨率取决于物镜的数值孔径(NA),因此使用高NA物镜来实现高分辨率图像至关重要。奥林巴斯提供一套高NA物镜,包括我们的X Line物镜,这些物镜具有高数值孔径(NA)、图像平坦度和色彩校正功能,可在更大的视场内提高图像分辨率。对于深层组织成像,我们的A Line硅油浸没物镜的折射率与活细胞接近,可实现更明亮、更高分辨率的3D成像,并且球面像差很小。
为了在使用FVMPE-RS多光子系统进行深层成像时提高分辨率,TruResolution物镜采用了自动校正环,可动态补偿球面像差,同时保持准确的焦点位置。它们会在立体图像的每个平面上自动调整,从而提供更清晰、更明亮的深层3D图像。
为了在图像处理过程中消除图像模糊,以获得更清晰、更锐利的高分辨率图像,奥林巴斯为激光共焦和奥林巴斯超分辨率(OSR)图像开发了专门的TruSight 2D和3D反卷积算法。
奥林巴斯激光扫描显微镜的光学分辨率是多少?
对于需要更高分辨率的研究,如共定位分析,用于FV 3000系统的奥林巴斯超分辨率(OSR)成像模块可以循序或同时以接近典型共焦显微镜分辨率两倍的约120 nm横向(X-Y)分辨率采集四个荧光信号。
激光扫描共焦显微镜的最大放大倍率是多少?
FLUOVIEW系列FV 3000显微镜可视具体应用与从1.25倍低倍物镜到150倍高倍物镜的各种倍率物镜配合使用。1.25倍至4倍的低放大倍率物镜适用于采集整个组织的结构。要采集构成组织的细胞的形貌,请使用10倍至40倍之间的中等放大倍率物镜;要采集细胞内的微观结构,通常使用60倍或更高倍的高放大倍率物镜。通过减小扫描镜的角度,光学变焦可以进一步将图像的放大倍率提高到超过物镜放大倍率水平的50倍。
一台激光扫描共焦显微镜的价格是多少?
根据您的预算和应用,激光扫描显微镜可以内置到系统中。如果您想要观测的目标物体有限,则可以将激光器数量、探测器和物镜类型的限制在一个实惠的价格。随着研究目标的逐渐变化和发展,还可以通过添加必要的单元来升级系统。
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